离心法管就是一个简单的可以承受高转速压力的管子 ，比如离一些样品 ，分离出上清沉淀 。 蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管 ，目前最常用的就是Millipore的 。目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定 。可重复使用 ，使用一次就扔掉太浪费 。以下是小代总结的使用方法和注意事项 。
离心力反渗透装置管很有能够某个有些相似于内管和外管的多个个个部分 ，内管内是暗含必要氧碳原子式式量的膜 ，当公路抽滤时 ，氧碳原子式式量比它小的就漏到底下的水管接头(即外管)中了 ，氧碳原子式式量比它大的就挪用在后面(即内管内) ，这就是反渗透膜膜膜膜的原里 。反渗透膜膜膜膜抽滤管的选购主要看看要挪用那个个部分有机化合物 ，就选购比超小氧碳原子式式量小的 ，假设你想要挪用26KD的 ，你想要的反渗透膜膜膜膜管必须比26小 。但俩者也能有必要的收入差距 ，譬如 ，选购20-25KD两者之间的都不恰当 ，这就是由于26的也能够会进来(这就是由制做流程绝对的) 。之所以选购20KD一下的反渗透膜膜膜膜管是比较恰当 。
1、选择合适的超滤管 ，主要考虑MWCO和浓缩体积 ，最常见的是10kD 。又取舍多大型号挪用原子量比效适于呢?10kDa、 5kDa、或者是30kDa?经常应挪用原子量还应多于目标蛋清酶原子量的1/3 ，造问目标蛋清酶原子量为35kDa ，就可不能能取舍10kDa挪用原子量的反渗透装置 管 。若目标蛋清酶原子量为10kD左右时间 ，则可不能能用挪用原子量3kD的反渗透装置管 。充分阅读文章在使用证明书 ，提前准备反渗透装置膜对差异的催化产物的耐受力地步进行差异 ，数据表格含有 。
2、新买来的超滤是干燥的 ，使用前加入MilliQ水 ，水量完全过膜 ，冰浴或冰箱里预冷几分钟 。然后将水倒出 ，即可加入蛋白液 ，加入的多少 ，以不超过管顶的白线为准 。操作要轻 ，加入蛋白液前 ，超滤管需要插在冰上预冷 。
3、平衡 。质量和重心二者都要达到平衡 。注意转速和加速度不可太快 ，否则直接损坏超滤膜 。开始离心超滤(离心机预冷至4度) 。不同离心机的转速 rpm换算成g之后 ，有所不同 。具体可参阅附件里的说明书 。离心机的加速度调至最低档 ，减小对膜的压力 。注意 ，一定要等离心机达到目的转速之后 ，方可离开离心机 ，否则离心机出问题时 ，无法第一时间处理 ，后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直) 。在实际使用中 ，一般转速开的比说明书里的要低 ，这样可以延长离心管的使用寿命 。
4、当高浓到吃不完1ml时 ，【取50ul国内自主研发Bradford硫酸铜溶液 ，加如10ul流穿 ，看有木有变颜色 ，谨以诊断反渗透装置膜膜膜管有无跳开核淀粉酶 。假设管漏了 ，将高层和流穿如何倒进新管内已经反渗透装置膜膜膜 。要精准度诊断有无漏管 ，用5mg/ml的BSA抽滤10min ，再取流穿 ，跑核淀粉酶胶或Bradford粗测】 ，随时加如吃不完的核淀粉酶液高浓(在冰里作业 ，放到核淀粉酶加热) ，到其他高浓液都加完说不定 。抽滤过程中 中还要注意有无遭受核淀粉酶积淀 ，导至堵管 。若遭受积淀 ，要知道积淀的到底问题 ，是核淀粉酶渗透压过高还有Buffer各种适;后面常用数根反渗透装置膜膜膜管时候反渗透装置膜膜膜 ，减低渗透压的最好的办法缓解 ，后面的工艺是换各个的Buffer ，到核淀粉酶不遭受积淀为 止 。
5、前面几步用以浓缩蛋白 ，如果要换Buffer ，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候 ，轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤) ，再 浓缩至1ml左右 ，连续三次 ，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定 ，一般不多于500ul ，也有浓缩至200ul以内的情况 。按照每次至少10倍 左右的体积浓缩算 ，三次达到1000倍以上 ，基本上可以达到换buffer的目的 。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作 ，用黄枪头(200ul)取 ，轻轻顺着边缘插入枪头 ，轻轻吹打、混匀蛋白液 ，注意不要碰到超滤膜 ，然后吸取浓缩液 ，每次吸接近200ul ，直到吸完 。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取 ，否则难度太大 ，有可能损坏超滤膜 。最后加入MilliQ水到超滤管中 ，没过 超滤膜 ，防止膜失水变干 。
以下是处理超滤管 ，重复利用超滤管的步骤 。
7、倒出反渗透装置管里的水 ，用milliQ水慢慢润洗三次 ，【若管底有可見的核蛋白积累 ，行先参与水 ，那么用枪头吹打 ，主要不用弄伤膜 ，吹打至积累悬起 ，那么放干 ，不可作污水猛冲】那么参与0.2M的NaOH盐溶剂 ，常温放上20min ，前几天均衡性反渗透装置管 。再离心力10min 。倒出无残留的NaOH盐溶剂 ，将 管芯浸到MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放上3个天,再换好的水,放上3个天 ，一个劲溶解稀释NaOH氧浓度 。50ml管和盖子用污洗水 ，开口处如何再用 MilliQ洗水很脏 。
8、拆下水的压强的管芯 ，加至说出满的MilliQ水 ，50ml管也加注MilliQ水 ，将管芯小心复制到50ml离心法管 ，排下来方面水 ，第二步盖起来盖子 ，放4度保留 ，陪你到到时候用 。一样 讲 ，通过上述所说流程和特别注意事情 ，每根有效四五年都不会坏 。
电 话
地 图
分 享
咨 询